خلاصه و توضیح آزمون
مالاریا یک بیماری تب دار، همولیتیک و منتقله از پشه است که بیش از 200 میلیون نفر را مبتلا می کند و سالانه بیش از یک میلیون نفر را می کشد.این بیماری توسط چهار گونه پلاسمودیوم ایجاد می شود: P. falciparum، P. vivax، P. ovale و P. malariae.این پلاسمودیاها همگی گلبول های قرمز انسان را آلوده کرده و از بین می برند و باعث ایجاد لرز، تب، کم خونی و اسپلنومگالی می شوند.P. falciparum باعث بیماری شدیدتری نسبت به سایر گونه های پلاسمودیایی می شود و بیشترین مرگ و میر ناشی از مالاریا را تشکیل می دهد.P. falciparum و P. vivax شایع ترین پاتوژن ها هستند، با این حال، تنوع جغرافیایی قابل توجهی در توزیع گونه ها وجود دارد.
به طور سنتی، مالاریا با نمایش ارگانیسم‌ها بر روی لام‌های ضخیم رنگ‌آمیزی شده با گیمسا از خون محیطی تشخیص داده می‌شود و گونه‌های مختلف پلاسمودیوم با ظاهرشان در گلبول‌های قرمز آلوده تشخیص داده می‌شوند.این تکنیک قادر به تشخیص دقیق و قابل اعتماد است، اما تنها زمانی که توسط میکروسکوپ‌های ماهر با استفاده از پروتکل‌های تعریف‌شده انجام شود.
کیت تست سریع آنتی ژن مالاریا Pf / Pan برای حل این موانع توسعه یافته است.این آزمایش از یک جفت آنتی بادی مونوکلونال و پلی کلونال برای پروتئین اختصاصی P. falciparum، هیستیدین Repeat Protein II (pHRP-II) و یک جفت آنتی بادی مونوکلونال علیه پلاسمودیوم لاکتات دهیدروژناز (pLDH)، پروتئینی که توسط چهار گونه از این پروتئین تولید می‌شود، استفاده می‌کند. سه پلاسمودیای دیگراین می تواند توسط پرسنل آموزش ندیده یا با حداقل مهارت و بدون تجهیزات آزمایشگاهی انجام شود.
اصل
کیت تست سریع مالاریا Pf/P یک روش ایمونواسی کروماتوگرافی جریان جانبی است.اجزای نوار تست عبارتند از: 1) یک پد مزدوج رنگ شرابی حاوی آنتی بادی ضد pHRP-II موش کونژوگه با طلای کلوئیدی (مجموعه‌های pHRP II-طلا) و آنتی‌بادی ضد pLDH موش کونژوگه با طلای کلوئیدی (کانژوگه‌های pLDH-طلا)،
2) یک نوار غشایی نیتروسلولزی حاوی دو باند تست (باندهای Pan و Pv) و یک نوار کنترل (باند C).پان باند از قبل با آنتی بادی ضد pLDH مونوکلونال پوشانده شده است که توسط آن می توان عفونت با هر یک از چهار گونه پلاسمودیایی را تشخیص داد، نوار Pf با آنتی بادی های پلی کلونال ضد pHRP-II برای تشخیص عفونت Pf پوشش داده شده است، و نوار C با IgG ضد موش بز پوشانده شده است.
در طول آزمایش، حجم مناسبی از نمونه خون در چاه نمونه (S) کاست آزمایش توزیع می شود، یک بافر لیز به چاه بافر (B) اضافه می شود.بافر حاوی مواد شوینده‌ای است که گلبول‌های قرمز خون را لیز می‌کند و آنتی‌ژن‌های پلاسمودیوم مختلفی را آزاد می‌کند که با اثر مویرگی در سراسر نوار نگه‌داشته شده در کاست مهاجرت می‌کنند.اگر pHRP-II در نمونه موجود باشد به ترکیبات pHRP II-طلا متصل می شود.سپس ایمونوکمپلکس توسط آنتی بادی های ضد pHRPII از قبل پوشش داده شده روی غشاء گرفته می شود و یک نوار Pf رنگ شرابی را تشکیل می دهد که نشان دهنده نتیجه تست Pf مثبت است.اگر pLDH در نمونه وجود داشته باشد به ترکیبات طلای pLDH متصل می شود.سپس ایمونوکمپلکس توسط آنتی بادی ضد pLDH از قبل پوشش داده شده روی غشاء گرفته می شود و یک نوار پان رنگ شرابی را تشکیل می دهد که نشان دهنده نتیجه آزمایش پلاسمودیوم مثبت است.در غیاب پان باند، نتیجه آزمایش مثبت برای هر یک از سه پلاسمودیای دیگر می تواند توصیه شود.
عدم وجود هر گونه نوار تست (Pan و Pf) نشان دهنده نتیجه منفی است.این آزمایش شامل یک کنترل داخلی (باند C) است که باید یک نوار رنگی شرابی از مجموعه ایمنی ضد موش بز IgG / IgG موش (pHRP-II و pLDH-طلایی کونژوگه) را بدون توجه به رشد رنگ در هر یک از نوارهای آزمایشی نشان دهد.در غیر این صورت، نتیجه آزمایش نامعتبر است و نمونه باید دوباره با دستگاه دیگری آزمایش شود.
